Тест «CEDIA® Карбамазепин II»

Кат. №: 100006 (Набор 17 x 17 мл)                                  Для диагностики in vitro

 

Предназначение:

 

Тест «CEDIA® Карбамазепин II» - это набор реагентов для диагностики in vitro, предназначенный для количественного определения содержания карбамазепина в сыворотке или в плазме человека.

 

Резюме и разъяснение теста

 

Карбамазепин является противосудорожным средством, используемым, в частности, для лечения невралгии троичного нерва1, всех форм парциальных судорожных эпилепсий, генерализованных тонико-клонических припадков, а также простых и сложных парциальных припадков2-4. Эффективная концентрация карбамазепина в сыворотке существенна для прекращения припадка. Однако концентрация карбамазепина в сыворотке лишь в некоторой степени зависит от дозы5,6, вследствие индивидуальных различий в абсорбции, метаболизме и выведении лекарства. Более того, одновременный прием других противоэпилептических средств может значительно повысить уровень карбамазепина в сыворотке6.

 

Токсичность карбамазепина, связанная с терапией, может зависеть от дозы, но может и не зависеть от дозы 2-4. Однако симптомы расстройства центральной нервной системы, такие как вертиго, головокружение, двоение в глазах, зависят от дозы при продолжительном лечении. В совокупности с другой клинической информацией, мониторинг уровней карбамазепина даст врачам эффективное средство помощи в подборе дозировки и достижении оптимального терапевтического эффекта, и позволит избежать как недостаточных (субтерапевтических), так и токсичных уровней лекарства.

 

В тесте «CEDIA Карбамазепин II» применена технология рекомбинатной ДНК (Патент США №4708929) для получения уникальной системы гомогенного иммуноферментного анализа7.

 

В основе теста лежит бактериальный фермент b-галактозидаза, который с помощью генной инженерии был разделен на два неактивных фрагмента. Эти фрагменты спонтанно связываются вновь, образуя действующий фермент, который в формате теста расщепляет субстрат, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить методом спектрофотометрии.

 

В ходе теста анализируемое вещество в образце конкурирует с анализируемым веществом, сопряженным с одним неактивным фрагментом b-галактозидазы, за место связывания антитела.

Если анализируемое вещество присутствует в образце, оно связывается с антителом, оставляя неактивные фрагменты фермента свободными для образования активного фермента. Если анализируемое вещество отсутствует в образце, антитело связывается с анализируемым веществом, сопряженным с неактивным фрагментом, препятствуя повторному соединению неактивных фрагментов b-галактозидазы, и при этом не происходит образования активного фермента. Количество образованного активного фермента и вызванное этим изменение абсорбции прямо пропорциональны количеству лекарства, присутствующего в образце.

 

Реагенты

 

1 ЕА буферный растворитель: Содержит 3-(N-морфолино) пропан сульфоновую кислоту, моноклональные антитела к карбамазепину в концентрации 49 мг/л, стабилизатор и консервант.

1а ЕА Реагент: Содержит акцепторную часть фермента в концентрации 0,171 г/л, стабилизатор, буферные соли и консервант.

2 ED буферный растворитель: Содержит 2-(N-морфолино) этан сульфоновую кислоту и консервант.

2а ED реагенты: Содержит донорную часть фермента в концентрации 22,1 мкг/л, сопряженную с карбамазепином, хлорофенол красный-b-D-галактопиранозид в концентрации 1,64 г/л, буферные соли, стабилизатор и консервант.

 

Требуемые дополнительно материалы (продаются отдельно):

CEDIA Core TDM Multi-Cal (Кат. № 100007)

Имеющиеся в продаже контрольные материалы – Обратитесь в Службу технической поддержки компании Microgenics, чтобы получить рекомендации относительно подходящих контрольных материалов.

 

Меры предосторожности и предупреждения

 

Реагенты содержат азид натрия. Избегать контакта с кожей и слизистой оболочкой. Промыть пораженные участки большим количеством воды. Немедленно обратиться за врачебной помощью, если реагенты попали в глаза или вовнутрь. Азид натрия может вступать в реакцию со свинцовой или медной сантехникой с образованием потенциально взрывоопасных азидов металлов. При утилизации такие реагенты нужно всегда смывать большим количеством воды, чтобы не допустить накопления азидов. Очистить подверженные воздействию поверхности металлов 10% гидроксидом натрия.

 

Приготовление и хранение реагентов

 

Вынимайте набор из холодильника непосредственно перед приготовлением растворов.

 

Приготовление растворов производите в следующем порядке, чтобы максимально уменьшить вероятность возможного загрязнения:                                                                                             

 

Раствор донорской части фермента R2: Соединить емкость 2а (реагент ED) и емкость 2 (буферный растворитель ED) с помощью одного из входящих в комплект переходников. Смешать содержимое, мягко переворачивая сосуды так, чтобы весь сублимат из емкости 2а оказался в емкости 2, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить емкость 2а и переходник от емкости 2 и выбросить их. Закрыть емкость 2 крышкой и дать содержимому постоять примерно в течение 5 минут при температуре 15-25°С. Снова мягко перемешать содержимое и написать на этикетке бутылки дату разведения. Прежде чем использовать, нужно поставить бутыль на 30 минут в отсек анализатора, предназначенный для реагентов, или в холодильник.

 

Раствор акцепторной части фермента R1: Соединить емкость 1а (реагент EA) и емкость 1 (буферный растворитель EA) с помощью одного из входящих в комплект переходников. Смешать содержимое, мягко переворачивая сосуды так, чтобы весь сублимат из емкости 1а оказался в емкости 1, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить емкость 1а от переходника и выбросить. Закрыть наполненную емкость 1 крышкой и оставить примерно на 5 минут при температуре 15-25°С. Снова мягко перемешать содержимое и написать на этикетке емкости дату разведения. Прежде чем использовать, нужно поставить емкость на 30 минут в отсек анализатора, предназначенный для реагентов, или в холодильник.

 

ПРИМЕЧАНИЕ 1: Входящие в этот набор компоненты предназначены для использования в комплекте. Не смешивайте компоненты из разных партий.

ПРИМЕЧАНИЕ 2: Избегайте перекрестного загрязнения реагентов, следя за тем, чтобы крышки от емкостей с реагентами совпадали с емкостями. Раствор R2 (ферментный донор) должен быть желто-оранжевого цвета. Красный или пурпурно-красный цвет говорит о загрязнении реагента, и в таком случае его следует вылить.

ПРИМЕЧАНИЕ 3: Растворы R1 и R2 до анализа должны находиться при температуре отсека анализатора для реагентов. См. дополнительно в инструкции по применению конкретного анализатора.

ПРИМЕЧАНИЕ 4: Для обеспечения стабильности восстановленного реагента EA, его следует защищать от продолжительного непрерывного воздействия яркого света.

 

Храните реагенты при температуре 2-8°C. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ИХ. Для определения стабильности неоткрытых компонентов обратитесь к этикеткам на коробке или на бутылях для информации о сроке годности.

Раствор R1: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

Раствор R2: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

 

Сбор и обработка образцов

С тестом CEDIA Карбамазепин II можно использовать образцы сыворотки или плазмы (гепарин натрия или лития;натриевая соль ЭДТА). Некоторые пробирки с разделительным гелем могут быть непригодными для лекарственного мониторинга; обратитесь к информации, предоставленной производителем пробирок. Образцы могут храниться при температуре 2-8°C в течение 1 недели или 4 недель при -20°C. Избегайте повторяющегося замораживания и оттаивания. Центрифугируйте образцы, содержащие осадок. Постоянство времени сбора образцов после принятия последней дозы лекарства улучшит безопасность и эффективность противосудорожного средства.

 

Процедура анализа

Для выполнения этого анализа могут быть использованы биохимические анализаторы, которые позволяют поддерживать постоянную температуру, дозирование образцов пипеткой, смешивание реагентов, измерение скорости ферментативной реакции и точное определение времени реакции. Инструкции по применению, содержащие параметры конкретного прибора, поставляются компанией Microgenics.

 

Контроль качества и калибровка8

Рекомендуется калибровка по двум точкам

• после смены емкости реагента

• после смены партии реагента

• как это требуется в соответствии с процедурами контроля качества

 

Рекомендации по хорошей лабораторной практике предполагают, чтобы как минимум два уровня контроля качества (низкая и высокая точки) проверялись каждый день, когда образцы пациента анализируются, и каждый раз, когда производится калибровка. Проводите мониторинг контрольных величин на наличие каких-либо общих тенденций или сдвигов. Если обнаружены какие-либо общие тенденции или сдвиги, или результаты контрольных образцов не находятся в требуемом диапазоне, проверьте все рабочие параметры.

 

Результаты и ожидаемые значения

Тест «CEDIA® Карбамазепин II» предназначен для количественного анализа образцов пациентов в диапазоне концентраций от 0,5 мкг/мл до величины концентрации калибратора высокого диапазона Core TDM Multi-Cal High Calibrator (приблизительно 20 мкг/мл). Результаты анализа образцов, дающих величины ниже 0,5 мкг/мл, можно указывать в отчете как < 0,5 мкг/мл. Результаты анализа образцов, дающих величины больше 20 мкг/мл, можно указывать в отчете как > 20 мкг/мл, или можно разбавить образец в пропорции один к одному калибратором низкого диапазона Core TDM Multi-Cal Low Calibrator и провести анализ повторно. Величины, полученные при повторном анализе, следует рассчитывать как:

 

Фактическое значение = (2 x значение разведенного образца) - Концентрация калибратора низкого диапазона Core TDM Multi-Cal Low Calibrator

 

Используйте следующий коэффициент преобразования мкг/мл в мкмоль/л:

мкг/мл x 4,23 = мкмоль/л

мкмоль/л x 0,236 = мкг/мл

 

Терапевтическая эффективность и токсическое действие тесно связаны с концентрацией лекарства в сыворотке. Сообщалось, что эффективные концентрации карбамазепина в сыворотке для прекращения припадка составляют 8-12 мкг/мл4,9 для взрослых, получающих карбамазепин, как единственное противоэпилептическое средство. Были предложены также и другие лечебные диапазоны для карбамазепина5,10-13. Кроме того, и более низкие концентрации могут вызвать достаточный терапевтический эффект при использовании других противосудорожных средств в комбинации с карбамазепином. Терапевтические диапазоны приведены только в качестве справочного руководства для интерпретации наряду с другими имеющимися клиническими симптомами, и не должны приниматься как единственный показатель для изменения или подбора дозировки.

 

Ограничения

1. Характеристики теста «CEDIA Карбамазепин II» определялись только для сыворотки и плазмы человека, но не для анализа других жидкостей тела.

 

2. Число пациентов, у которых могут быть антитела к b-галактозидазе E. coli, чрезвычайно мало. Однако некоторые образцы, содержащие такие антитела, могут показать ошибочно высокие концентрации, не соответствующие клиническому профилю пациента. Если есть подозрения, что это так, пожалуйста, обратитесь за помощью в Службу технической поддержки компании Microgenics.

 

3. Этот тест был аттестован на анализаторах, использующих промывку интегральной камеры. Если Ваш анализатор не имеет промывки интегральной камеры, обратитесь к Вашему местному представителю компании Microgenics.

 

Конкретные рабочие характеристики

Типичные данные по рабочим характеристикам, полученные на анализаторе Hitachi 911, приведены ниже¹⁴. Результаты, полученные в Вашей лаборатории, могут отличаться от этих данных.

 

Воспроизводимость

Исследования точности результатов проводились с использованием смешанной человеческой сыворотки и контрольной сыворотки, основываясь на руководстве по проведению модифицированного эксперимента с повторением одинаковых испытаний (NCCLS), и дали следующие результаты

 

	Воспроизводимость   в пределах одного анализа			Общая   воспроизводимость
N x (мкг/мл) СО   (мкг/мл) КВ %	126 4,2 0,06 1,5	126 10,6 0,06 0,8	126 16,8 0,12 0,7	126 4,2 0,15 3,5	126 10,6 0,21 2,0	126 16,8 0,29 1,7

 

 

Сравнение методов

Сравнение использования анализа «CEDIA Карбамазепин II» (y) с доступным методом промышленного флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (x):

 

Регрессия Деминга y = 1,00x + 0,87 r = 0,986 Sy.x = 0.44

Линейная регрессия y = 0,98x + 0,99 r = 0,986 Sy.x = 0,62