Тест Дигоксин II CEDIA®

Тест Дигоксин II CEDIA^®

 Для диагностики in vitro

 

Кат. № 100005 (комплект 17 мл)

 

Назначение

Тест Дигоксин II CEDIA^® – это набор реагентов для диагностики in vitro, предназначенный для количественного определения содержания дигоксина в сыворотке и в плазме человека.

 

Резюме и разъяснение теста

Дигоксин широко используется для лечения застойной сердечной недостаточности и различных форм аритмии. Терапевтическое использование дигоксина повышает силу сокращений миокарда, в результате чего увеличивается систолический объём крови, уменьшается размер сердца, снижается венозное давление и объем крови. Терапевтическое использование дигоксина также стабилизирует и замедляет желудочковый ритм¹.

По результатам исследований, до 25% от общего числа госпитализированных пациентов, получавших дигоксин, в той или иной степени испытывали токсическое действие, и уровень смертности среди этих пациентов более чем вдвое превышал уровень смертности среди пациентов, которые не испытывали токсического действия препарата^2,3. Концентрация дигоксина от 0.9 до 2.0 нг/мл в сыворотке или в плазме обычно считается терапевтической⁴. Как правило, симптомы токсичности для человека наблюдаются при концентрации свыше 2.0 нг/мл; однако для отдельных пациентов даже концентрация 1.4 нг/мл является токсичной².

В сочетании с другими клиническими данными, мониторинг концентрации дигоксина в сыворотке или в плазме может дать врачу полезную информацию для корректировки индивидуальной дозировки, достижения оптимального терапевтического эффекта и для предотвращения как концентрации препарата, не дающей терапевтического эффекта, так и вредной токсичной концентрации⁵.

В тесте Дигоксин II CEDIA применена технология рекомбинатной ДНК (патент США №4708929) для получения уникальной системы гомогенного иммуноферментного анализа⁶.

В основе теста лежит бактериальный фермент b-галактозидаза, который с помощью генной инженерии был разделен на два неактивных фрагмента. Эти фрагменты спонтанно связываются вновь, образуя действующий фермент, который в формате теста расщепляет субстрат, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить методом спектрофотометрии.

В ходе теста, анализируемое вещество в образце конкурирует за место связывания антитела с анализируемым веществом, сопряженным с одним неактивным фрагментом b-галактозидазы. Если в образце присутствует анализируемое вещество, оно связывается с антителами, при этом неактивные фрагменты фермента свободно объединяются, образуя активный фермент. Если в образце отсутствует анализируемое вещество, антитело связывается с анализируемым веществом, сопряженным с неактивным фрагментом, подавляя повторное соединение неактивных фрагментов b-галактозидазы, при этом не происходит образования активного фермента.

Количество образованного активного фермента и вызванное этим изменение коэффициента поглощения прямо пропорциональны содержанию анализируемого вещества в образце⁸.

Реагенты

1 Буферный растворитель АФ (акцептора фермента): Содержит буферные соли, моноклональные антитела к дигоксину (0.10 мг/л), моноклональные антитела к дигитоксину (10.0 мг/л), моноклональные антитела к Т4 (40.0 мг/л), стабилизатор и консервант.

1а Реагент АФ: Содержит акцептор фермента (0.29 г/л), буферные соли и консервант.

2 Буферный растворитель ДФ (донора фермента): Содержит буферные соли, стабилизаторы и консервант.

2а Реагент ДФ: Содержит донор фермента, сопряженный с дигоксином (5.3 мкг/л); хлорфенол красный-b-галактопиранозид (1.93 г/л), стабилизаторы и консервант.

Требуемые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки (продаются отдельно):

Мульти-калибраторы Cardiac TDM Multi-Cal, Кат. № 100001

Имеющиеся в продаже контрольные материалы. Обратитесь в Службу технической поддержки компании Microgenics, чтобы получить рекомендации относительно подходящих контрольных материалов.

 

Меры предосторожности и предупреждения

Реагенты содержат азид натрия. Избегать попадания реагентов на кожу и слизистые оболочки. Промыть пораженные участки большим количеством воды. В случае попадания в глаза или при проглатывании немедленно обратиться к врачу. Азид натрия может вступать в реакцию со свинцовыми или медными водопроводными трубами, образуя взрывоопасные азиды металлов. При утилизации таких реагентов всегда смывать их большим количеством воды во избежание отложений азидов. Подверженные воздействию металлические поверхности очистить 10%  гидроксидом натрия.

 

Приготовление и хранение реагентов

Вынимать комплект из холодильника (2-8°С) следует непосредственно перед приготовлением растворов.

Приготовление растворов производите в следующем порядке, чтобы максимально уменьшить вероятность возможного загрязнения.

 

Раствор донора фермента R2: Соединить емкость 2а (реагент ДФ) с емкостью 2 (буферный растворитель ДФ) с помощью одного из прилагаемых переходников. Смешать содержимое, осторожно переворачивая емкости так, чтобы весь лиофилизированный материал из емкости 2а оказался в емкости 2, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить от емкости 2 и выбросить емкость 2а с переходником. Закрыть емкость 2 крышкой и дать содержимому постоять примерно в течение 5 минут при температуре 15-25°С. Снова перемешать содержимое и написать дату разведения на этикетке емкости. Перед применением поставить бутыль на 5 минут непосредственно в реагентный отсек анализатора или в холодильник (2-8°С) и дать постоять.

 

Раствор акцептора фермента R1: Соединить емкость 1а (реагент АФ) с емкостью 1 (буферный растворитель АФ) с помощью одного из прилагаемых переходников. Смешать содержимое, осторожно переворачивая емкости так, чтобы весь лиофилизированный материал из бутыли 1а оказался в бутыли 1, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить от емкости 1 и выбросить емкость 1а с переходником. Закрыть наполненную емкость 1 крышкой и оставить примерно на 5 минут при температуре 15-25°С. Снова перемешать содержимое и написать дату разведения на этикетке емкости. Перед применением поставить бутыль на 5 минут непосредственно в реагентный отсек анализатора или в холодильник (2-8°С) и дать постоять.

ПРИМЕЧАНИЕ 1: Входящие в этот набор компоненты предназначены только для использования в комплекте. Нельзя смешивать компоненты из разных наборов.

ПРИМЕЧАНИЕ 2: Избегайте перекрёстного загрязнения реагентов, следя за тем, чтобы крышки от емкостей соответствовали нужным емкостям. Рабочий раствор R2 должен быть желто-оранжевого цвета. Красный или пурпурно-красный цвет раствора говорит о загрязнении реагента, и в таком случае его следует вылить.

ПРИМЕЧАНИЕ 3: Перед проведением теста температура рабочих растворов R1 и R2 должна быть равна температуре реагентного отсека анализатора.

ПРИМЕЧАНИЕ 4: Для обеспечения стабильности разведенного раствора АФ необходимо беречь его от длительного воздействия яркого света.

Хранить реагенты при температуре 2-8°C.  НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ. Стабильность невскрытых емкостей с компонентами: срок годности указан на этикетке на коробке или на емкости.

Раствор R1: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

Раствор R2: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

 

Сбор и обработка образцов

Образцы для анализа на дигоксин рекомендуется брать через 6-8 часов после приема препарата⁷.

Со всеми образцами пациентов следует обращаться так, как если бы они были потенциально заразными.

 

Процедура анализа

Для выполнения этого анализа можно использовать анализаторы, которые позволяют поддерживать постоянную температуру, дозирование образцов пипеткой, смешивание реагентов, измерение скорости ферментативной реакции и точное определение времени реакции. Инструкции по применению с конкретными параметрами приборов можно получить в компании Microgenics.

ПРИМЕЧАНИЕ: Если анализатор Hitachi не читает штрих-код, числовую последовательность на этикетке со штрих-кодом можно ввести вручную с помощью клавиатуры.

Параметры настройки любых других анализаторов приведены в соответствующих инструкциях по применению приборов.

 

Контроль качества и калибровка⁸

 

Рекомендуется проводить двухточечную калибровку

• после смены емкости с реагентом

• после смены партии реагентов

• согласно требованиям процедур контроля качества

 

Рекомендации по хорошей лабораторной практике предполагают проведение контроля качества не менее чем на двух уровнях (низкая и высокая точка) каждый день, когда анализируются образцы пациентов, и каждый раз при проведении калибровки. Отслеживайте контрольные значения на предмет каких-либо тенденций или сдвигов. В случае обнаружения каких-либо тенденций или сдвигов, или если результаты контроля не отвечают указанному диапазону, необходимо проверить все рабочие параметры. Свяжитесь со Службой технической поддержки компании Microgenics для получения дополнительной помощи и рекомендаций относительно подходящего контрольного материала.

 

Результаты и ожидаемые значения

 

Тест Дигоксин II CEDIA предназначен для количественного анализа образцов пациентов от 0.15 нг/мл до 4 нг/мл. Если образец показывает результат свыше 4 нг/мл, в отчете можно либо указать > 4 нг/мл, либо разбавить образец пациента в соотношении один к одному образцом калибратора низкого диапазона и провести повторный анализ. Численный результат повторного анализа вычисляется следующим образом:

Фактическое значение = (2 х значение разведенного образца) – концентрация калибратора низкого диапазона

Если образец показывает результат менее минимально обнаруживаемой концентрации, то в отчете следует указать < 0.15  нг/мл.

Приведенные ниже опубликованные данные можно использовать в качестве справочных значений терапевтической и токсичной концентрации дигоксина. Для пересчета нг/мл в нмоль/л использовать следующий коэффициент пересчёта:

нг/мл х 0.781 = нмоль/л

нмоль/л х 1.28 = нг/мл

	Нетоксичен	Токсичен
Исследователь	Среднее значение ± СКО (нг/мл)	Среднее значение ± СКО (нг/мл)

 

Как правило, терапевтический диапазон дигоксина составляет от 0.9 до 2.0 нг/мл. Концентрации выше 2.0 нг/мл обычно считаются токсичными⁶. Есть сообщения о наложении диапазонов токсичности и нетоксичности². Поэтому для клинической диагностики следует учитывать клинические и лабораторные данные.

 

Ограничения

 

1. В крови пациентов с почечной или печеночной недостаточностью и беременных женщин на последних трех месяцах беременности обнаружены подобные дигоксину иммунореактивные вещества (DLIS). Исследования показали, что наличие DLIS в образце приводит к ошибочно завышенным результатам анализа на дигоксин^9-11.
2. Изготовитель препарата Digoxin immune FAb (дигибинд - Digibind^®) заявил, что не существует метода иммуноанализа, применимого для количественного определения дигоксина в сыворотке пациентов, принимающих этот препарат¹².
3. Образцы от пациентов, применяющих препарат Uzara^® для лечения диареи, могут показать ошибочно высокие концентрации дигоксина.
4. Число пациентов, у которых имеются антитела к b-галактозидазе E. coli, чрезвычайно мало. Однако некоторые образцы, содержащие такие антитела, могут показать ошибочно высокие концентрации дигоксина, не соответствующие клиническому профилю пациента.
5. Как и в любом тесте, использующем антитела мыши, существует вероятность влияния противомышиных антител человека (HAMA) в образце, что может привести к ошибочно завышенным результатам.

 

Конкретные рабочие характеристики

 

Ниже показаны типичные данные¹⁶, полученные на анализаторе Hitachi 911. Результаты, получаемые в вашей лаборатории, могут от них отличаться.

Воспроизводимость

Измерение воспроизводимости выполнялось на упакованных реагентах и на контрольной сыворотке, с использованием модифицированных руководящих указаний NCCLS по проведению повторяющихся испытаний. Были получены следующие результаты:

	Воспроизводимость в пределах прогона			Общая воспроизводимость

 

Сравнение методов

Сравнение результатов, полученных с помощью теста Дигоксин II CEDIA (y), с результатами доступного на рынке флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (x), дало следующую корреляцию (нг/мл):

 

Регрессия   Деминга	Линейная   регрессия

Число образцов: 99

Концентрации образцов находились в диапазоне от 0.17 до 3.21 нг/мл.

 

Линейность

Дигоксин был добавлен к образцу пациента, в котором отсутствовало анализируемое вещество, и был разбавлен калибратором низкого диапазона. Затем был определен процент выхода путем деления значения, полученного в результате теста, на ожидаемое значение. Ожидаемые значения вычислялись по угловым коэффициентам линейной регрессии для значений, полученных в результате теста.

 

% образца с высоким содержанием	Ожидаемое значение (нг/мл)	Значение, полученное в результате теста (нг/мл)	% выхода

 

Выход

Дигоксин был добавлен к нормальному образцу, в котором отсутствовало анализируемое вещество, и был разбавлен разными объемами образца пациента, в котором отсутствовало анализируемое вещество. Затем был определен процент выхода путем деления значения, полученного в результате теста, на ожидаемое значение. Ожидаемые значения вычислялись по угловым коэффициентам линейной регрессии для значений, полученных в результате теста.

 

% образца с высоким содержанием	Ожидаемое значение (нг/мл)	Значение, полученное в результате теста (нг/мл)	% выхода

 

Специфичность

Были протестированы следующие соединения на перекрестную реактивность:

Соединение	Испытываемая концентрация (нг/мл)	% перекрестной реактивности
16β дегидроэпиандростерон 17-α-гидрокси-прогестерон 3-дигидродигоксигенин 3-эпи-дигоксигенин α-ацетилдигоксин Ацетилсалициловая   кислота Ампициллин Аскорбиновая   кислота Атенолол β-ацетилдигоксин β-метилдигоксин Безафибрат Кофеин Канренон Каптоприл Кортикостерон Кортизол Кортизон Циклоспорин D-альдостерон Десланозид Дегидроэпиандростерон Диклофенак Дигитоксигенин Дигитоксин Дигоксигенин Дигоксигенин-бис-дигитоксизид Дигоксигенин-моно-дигитоксизид Дегидродигоксин Дипиридамол Допамин Эпи-дигоксигенин   глюкуронид Эстрадиол Эстриол Фуросемид Гилбенкамид Гитален K-строфантин Метилдофа N-деокси-кортизол Никотиновая   кислота Нитрофурантоин Уабаин Оксазепам Окситетрациклин Парацетамол Фенитоин Преднизолон Преднизон Прогестерон Просцилларидин Хинидин Хинидин   свободное основание Спиронолактон Сультиам Тестостерон Теофиллин Триметоприм

 

Не выявлено перекрёстного взаимодействия со следующими эндогенными веществами:

Вещество	Концентрация	Вещество	Концентрация
Билирубин Гемоглобин Ревматоидный   фактор	мг/дл г/дл ИЕ/мл	Триглицерид Общий   белок	г/дл г/дл

ИЕ - иммунизирующая единица

 

Чувствительность

Минимальная концентрация, определяемая с помощью теста: 0.15 нг/мл (0.19 мкмоль/л). Это значение было определено путем расчета концентрации дигоксина, которая дала бы реакцию, равную двум стандартным отклонениям выше калибратора низкого диапазона.