Главная / Лекарственный мониторинг / Тест N-ацетилпрокаинамид CEDIA®

Тест N-ацетилпрокаинамид CEDIA®

Тест N-ацетилпрокаинамид CEDIA^®

Для диагностики in vitro

Кат. № 100015 (Комплекты 17 х 17 мл)

Назначение

Тест N-ацетилпрокаинамид CEDIA^® – это набор реагентов для диагностики in vitro, предназначенный для количественного определения содержания N-ацетилпрокаинамида в сыворотке или в плазме человека.

Резюме и разъяснение теста

N-ацетилпрокаинамид (NAPA), первичный активный метаболит антиаритмического препарата прокаинамида, образуется в результате ацетилирования прокаинамида в печени^1-3. NAPA является более слабым антиаритмическим препаратом, чем прокаинамид, и имеет качественно другое кардиотоническое действие^4,5. В "медленных" ацетиляторах примерно 25% дозы прокаинамида превращается в NAPA; в "быстрых" ацетиляторах до 40% дозы прокаинамида превращается в NAPA^1,5. Скорость почечного выведения NAPA ниже, чем для прокаинамида, поэтому при почечной недостаточности или при расстройстве кровообращения NAPA может быстро накапливаться в организме ^1,2,4. В таких случаях концентрация NAPA может достичь токсичного уровня, что усугубляется в случае "быстрых" ацетиляторов^1-3,5.

Скорость превращения прокаинамида в печени и скорость почечного выведения прокаинамида и NAPA изменяются, и может возникнуть сопутствующее токсическое воздействие, поэтому при длительной терапии прокаинамидом следует контролировать содержание обоих веществ в крови пациентов^1,3,4.

В тесте NAPA CEDIA применена технология рекомбинатной ДНК (патент США №4708929) для получения уникальной системы гомогенного иммуноферментного анализа⁶.

В основе теста лежит бактериальный фермент b-галактозидаза, который с помощью генной инженерии был разделен на два неактивных фрагмента (части), акцептор фермента (АФ) и донор фермента (ДФ). Эти фрагменты спонтанно связываются вновь, образуя действующий фермент, который в формате теста расщепляет субстрат, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить методом спектрофотометрии.

В ходе теста, анализируемое вещество в образце конкурирует за место связывания антитела с анализируемым веществом, сопряженным с одним неактивным фрагментом b-галактозидазы. Если в образце присутствует анализируемое вещество, оно связывается с антителами, при этом неактивные фрагменты фермента свободно объединяются, образуя активный фермент. Если в образце отсутствует анализируемое вещество, антитело связывается с анализируемым веществом, сопряженным с неактивным фрагментом, подавляя повторное соединение неактивных фрагментов b-галактозидазы, при этом не происходит образования активного фермента. Количество образованного активного фермента и вызванное этим изменение коэффициента поглощения прямо пропорциональны содержанию препарата в образце.

Реагенты

1 Буферный растворитель АФ: Содержит буферную 3-(N-морфолино)пропан-сульфоновую кислоту, буферные соли, моноклональные антитела к NAPA (100 мг/л), стабилизатор и консервант (17 мл).

1а Реагент АФ: Содержит акцептор фермента (0.171 г/л), буферные соли, стабилизатор и консервант.

2 Буферный растворитель ДФ: Содержит 2-(N-морфолино)этанан-сульфоновую кислоту, буферные соли и консервант (17 мл).

2а Реагент ДФ: Содержит донор фермента, сопряженный с NAPA (45.7 мкг/л); хлорфенол красный-b-D-галактопиранозид (1.64 г/л); NAPA (0.28 мг/л), стабилизатор и консервант.

Требуемые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки (продаются отдельно):

Мульти-калибраторы CEDIA Cardiac TDM Multi-Cal, Кат. № 100001

Имеющиеся в продаже контрольные материалы - обратитесь в Службу технической поддержки компании Microgenics, чтобы получить рекомендации относительно подходящих контрольных материалов.

Меры предосторожности и предупреждения

Реагенты содержат азид натрия. Избегать попадания реагентов на кожу и слизистые оболочки. Промыть пораженные участки большим количеством воды. В случае попадания в глаза или при проглатывании немедленно обратиться к врачу. Азид натрия может вступать в реакцию со свинцовыми или медными водопроводными трубами, образуя взрывоопасные азиды металлов. При утилизации таких реагентов всегда смывать их большим количеством воды во избежание отложений азидов. Подверженные воздействию металлические поверхности очистить 10% гидроксидом натрия.

Приготовление и хранение реагентов

Вынимать комплект из холодильника следует непосредственно перед приготовлением растворов.

Приготовление растворов производите в следующем порядке, чтобы максимально уменьшить вероятность возможного загрязнения.

Раствор донора фермента R2: Соединить емкость 2а (реагент ДФ) с емкостью 2 (буферный растворитель ДФ) с помощью одного из прилагаемых переходников. Смешать содержимое, осторожно переворачивая емкости так, чтобы весь лиофилизированный материал из емкости 2а оказался в емкости 2, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить от емкости 2 и выбросить емкость 2а с переходником. Закрыть емкость 2 крышкой и дать содержимому постоять примерно в течение 5 минут при температуре 15-25°С. Снова перемешать содержимое и написать дату разведения на этикетке емкости. Перед применением поставить бутыль на 5 минут непосредственно в реагентный отсек анализатора или в холодильник и дать постоять.

Раствор акцептора фермента R1: Соединить емкость 1а (реагент АФ) с емкостью 1 (буферный растворитель АФ) с помощью одного из прилагаемых переходников. Смешать содержимое, осторожно переворачивая емкости так, чтобы весь лиофилизированный материал из бутыли 1а оказался в бутыли 1, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить от емкости 1 и выбросить емкость 1а с переходником. Закрыть наполненную емкость 1 крышкой и оставить примерно на 5 минут при температуре 15-25°С. Снова перемешать содержимое и написать дату разведения на этикетке емкости. Перед применением поставить бутыль на 5 минут непосредственно в реагентный отсек анализатора или в холодильник и дать постоять.

ПРИМЕЧАНИЕ 1: Входящие в этот набор компоненты предназначены только для использования в комплекте. Нельзя смешивать компоненты из разных наборов.

ПРИМЕЧАНИЕ 2: Избегайте перекрёстного загрязнения реагентов, следя за тем, чтобы крышки от емкостей соответствовали нужным емкостям. Рабочий раствор R2 (донор фермента) должен быть желто-оранжевого цвета. Красный или пурпурно-красный цвет раствора говорит о загрязнении реагента, и в таком случае его следует вылить.

ПРИМЕЧАНИЕ 3: Перед проведением теста температура рабочих растворов R1 и R2 должна быть равна температуре реагентного отсека анализатора. См. дополнительно инструкции по применению конкретного анализатора.

ПРИМЕЧАНИЕ 4: Для обеспечения стабильности разведенного раствора АФ необходимо беречь его от длительного воздействия яркого света.

Хранить реагенты при температуре 2-8°C. НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ. Стабильность невскрытых емкостей с компонентами: срок годности указан на этикетке на коробке или на емкости.

Раствор R1: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

Раствор R2: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

Сбор и обработка образцов

При анализе можно использовать образцы сыворотки или плазмы (Na гепарин или Li гепарин; Na ЭДТА). Для обеспечения сохранности образца со времени сбора до момента анализа необходимо избегать пенообразования у образцов, а также повторного замораживания и оттаивания. Образцы, содержащие твёрдые частицы, следует центрифугировать. Образцы должны храниться закрытыми при температуре 2-8°С, и анализ следует провести в течение 1 недели после сбора. Если невозможно провести анализ в течение 1 недели или если образец необходимо транспортировать, то образцы должны храниться закрытыми и в замороженном состоянии. При температуре -20°С образцы могут храниться в течение 4 недель. Со всеми образцами пациентов следует обращаться так, как если бы они были потенциально заразными.

Процедура анализа

Для выполнения этого анализа можно использовать анализаторы, которые позволяют поддерживать постоянную температуру, дозирование образцов пипеткой, смешивание реагентов, измерение скорости ферментативной реакции и точное определение времени реакции. Инструкции по применению с конкретными параметрами приборов можно получить в компании Microgenics.

ПРИМЕЧАНИЕ: Если анализатор не читает штрих-код, числовую последовательность на этикетке со штрих-кодом можно ввести вручную с помощью клавиатуры.

Контроль качества и калибровка⁷

Рекомендуется проводить двухточечную калибровку

• после смены емкости с реагентом

• после смены партии реагентов

• согласно требованиям процедур контроля качества

Рекомендации по хорошей лабораторной практике предполагают проведение контроля качества не менее чем на двух уровнях (низкая и высокая точка) каждый день, когда анализируются образцы пациентов, и каждый раз при проведении калибровки. Отслеживайте контрольные значения на предмет каких-либо тенденций или сдвигов. В случае обнаружения каких-либо тенденций или сдвигов, или если результаты контроля не отвечают указанному диапазону, необходимо проверить все рабочие параметры. Свяжитесь со Службой технической поддержки компании Microgenics для получения дополнительной помощи.

Результаты и ожидаемые значения

Тест NAPA CEDIA предназначен для количественного анализа образцов пациентов от 0.6 мкг/мл до значения калибратора высокого диапазона Cardiac TDM Multi-Cal High Calibrator (примерно 30 мкг/мл). Если образец показывает результат менее 0.6 мкг/мл, то в отчете следует указать < 0.6 мкг/мл. Если образец показывает результат свыше 30 мкг/мл, в отчете можно либо указать > 30 мкг/мл, либо разбавить образец пациента в соотношении один к одному образцом калибратора низкого диапазона Cardiac TDM Multi-Cal Low Calibrator и провести повторный анализ. Численный результат повторного анализа вычисляется следующим образом:

Фактическое значение = (2 х значение разведенного образца) – концентрация калибратора низкого диапазона Cardiac TDM Multi-Cal Low Calibrator

Для пересчета мкг/мл в мкмоль/л использовать следующий коэффициент пересчёта:

мкг/мл х 3.61 = мкмоль/л

мкмоль/л х 0.277 = мкг/мл

Ожидаемый терапевтический диапазон суммы NAPA и прокаинамида: от 5 до 30 мкг/мл. Однако концентрация NAPA в сыворотке или в плазме зависит от времени последнего введения прокаинамида; от способа введения; от сопутствующих вводимых препаратов; от состояния образца; от времени взятия образца и от индивидуальных вариаций поглощения, биотрансформации, распределения и выведения. Поэтому указанный терапевтический диапазон приведен только в качестве справочной информации для интерпретации наряду с другими клиническими симптомами и историей болезни⁸.

Ограничения

Как и в любом тесте, использующем антитела мыши, существует вероятность влияния противомышиных антител человека (HAMA) в образце, что может привести к ошибочно завышенным результатам.

Число пациентов, у которых имеются антитела к b-галактозидазе E. coli, чрезвычайно мало. Однако некоторые образцы, содержащие такие антитела, могут показать ошибочно высокие результаты, не соответствующие клиническому профилю пациента.

Конкретные рабочие характеристики

Ниже показаны типичные данные⁹, полученные на анализаторе Hitachi 911. Результаты, получаемые в вашей лаборатории, могут от них отличаться.

Воспроизводимость

Измерение воспроизводимости выполнялось анализатором Hitachi 911 на упакованных реагентах и на контрольной сыворотке, с использованием модифицированных руководящих указаний NCCLS по проведению повторяющихся испытаний. Были получены следующие результаты:

Воспроизводимость в пределах прогона

Общая воспроизводимость

x (мкг/мл)

SD (мкг/мл)

CV%

120

1,9

0,11

5,8

120

4,4

0,15

3,4

120

1,9

0,14

7,4

120

1,9

0,14

7,4

120

4,4

0,18

4,1

120

10,8

0,31

2,9

Сравнение методов

Сравнение результатов, полученных в тесте NAPA CEDIA (y), с результатами доступного на рынке флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (x), дало следующую корреляцию (мкг/мл):

Регрессия Деминга	Линейная регрессия

Число образцов: 125

Концентрации образцов находились в диапазоне от 0.8 до 24.2 мкг/мл.

Линейность

N-ацетилпрокаинамид был добавлен к нормальному образцу пациента, в котором отсутствовало анализируемое вещество, и затем был разбавлен разными количествами калибратора низкого диапазона Cardiac TDM Multi-Cal Low Calibrator. Затем был определен процент выхода путем деления значения, полученного в результате теста, на ожидаемое значение.

% образца с высоким содержанием

Ожидаемое значение (мкг/мл)

Значение, полученное в результате теста (мкг/мл)

% выхода

100

---

23,86

21,27

18,68

16,09

13,50

10,90

8,31

5,72

3,13

---

25,09

22,89

20,81

18,64

15,69

13,79

11,18

8,44

5,68

2,90

0,43

---

95,9

97,8

99,8

97,5

102,2

102,6

101,6

99,3

92,7

---

Выход

N-ацетилпрокаинамид был добавлен к нормальному образцу пациента, в котором отсутствовало анализируемое вещество, и затем был разбавлен разными количествами образца пациента, в котором отсутствовало анализируемое вещество. Затем был определен процент выхода путем деления значения, полученного в результате теста, на ожидаемое значение.

% образца с высоким содержанием

Ожидаемое значение (мкг/мл)

Значение, полученное в результате теста (мкг/мл)

% выхода

100

---

21,18

18,84

16,50

14,16

11,82

9,49

7,15

4,81

2,47

---

23,56

20,43

18,76

16,24

14,39

11,88

9,29

7,54

4,81

2,25

0,50

---

96,5

99,6

98,4

101,6

100,5

97,9

105,5

100,0

91,1

---

Специфичность

Были протестированы следующие соединения на перекрестную реактивность с тестом NAPA CEDIA.

Не выявлено перекрёстного взаимодействия теста NAPA CEDIA со следующими веществами:

Вещество

Концентрация

Вещество

Концентрация

Билирубин

Гемоглобин

Ревматоидный фактор

≤ 60 мг/дл

≤ 1000 мг/дл

≤ 85 МЕ/мл

Общий белок

Триглицериды

≤ 13 г/дл

≤ 1000 мг/дл

Чувствительность

Минимальная концентрация, определяемая с помощью теста NAPA CEDIA: 0.6 мкг/мл.