Тест DRI® Котинин
Тест «DRI® Котинин» microgenics
№ по каталогу: 0394 (набор 100 мл) Для диагностики in vitro
0395 (набор 500 мл)
Предназначение
Тест «DRI® Котинин» - это набор для диагностики in vitro, предназначенный для качественного и полуколичественного определения уровня котинина в моче человека на пороговом уровне 500 нг/мл. Этот тест является средством, помогающим определить уровень котинина после использования табачной продукции или ее воздействия.
Резюме и разъяснение теста
Курение табака или пассивное вдыхание дыма табака приводит к абсорбции никотина через легкие и слизистые оболочки рта. Поглощенный никотин легко превращается в свой основной матаболит – котинин.1, 2,3 Котинин можно обнаружить в моче курильщиков даже через несколько дней после прекращения курения.
Статус курения конкретного человека можно определить несколькими способами, включая измерение тиоцианата, оксида углерода и котинина. 4, 5, 6 Измерение оксида углерода или тиоцианата может ложно указать на употребление табака, так как и то, и другое вещество может исходить из других источников окружающей среды. 7 С другой стороны, котинин может образоваться только в результате метаболизма никотина, следовательно, он является лучшим индикатором статуса курения. 8
Тест «DRI® Котинин» - это набор жидких, готовых к употреблению реагентов для гомогенного иммуноферментного анализа. Анализ основан на конкуренции между котинином, помеченным ферментом глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназой (G6PDH), и свободным котинином в образце за фиксированное количество мест связывания специфического к котинину антитела. Активность фермента G6PDH определяется методом спектрофотометрии при 340нм путем изменения его способности превращать никотинамид аденин динуклеотид (NAD) в NADH.
Реагенты
Реагент, содержащий антитела/субстрат: Содержит моноклональные антитела мыши к котинину, глюкозо-6-фосфат (G6P) и никотинамид аденин динуклеотид (NAD) в Трис-буфере с консервантом (азид натрия).
Реагент, содержащий конъюгат фермента: Содержит котинин, помеченный глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназой (G6PDH), в Трис-буфере с консервантом (азид натрия).
Требуемые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки:
№ по каталогу 0460 DRI® Контрольное вещество низкого содержания котинина,
5 мл
0470 DRI® Контрольное вещество высокого содержания котинина,
5 мл
0404 DRI® Калибровочный набор на котинин, 6 х 5мл
Меры предосторожности и предупреждения
- Тест предназначен только для диагностики in vitro. Реагенты нельзя глотать.
- Используемые в компонентах анализа реагенты содержат азид натрия, который может вступить в реакцию со свинцовой или медной сантехникой с образованием потенциально взрывоопасных азидов металлов. При утилизации такие реагенты нужно всегда смывать большим количеством воды, чтобы не допустить накопления азидов.
Приготовление и хранение реагентов
Реагенты готовы для применения. Никакого приготовления реагентов не требуется. Все компоненты набора при условии хранения в холодильнике стабильны в течение срока годности, указанного на этикетке. Не используйте реагенты после истечения срока годности.
Сбор и обработка образцов
Собирайте образцы мочи в пластиковые или стеклянные емкости. Желательно проводить анализ свежих образцов мочи.
Компания Microgenics рекомендует использовать свежие образцы мочи. Если первичный анализ образцов не проводится в течение 7 дней после сбора, образцы следует хранить в замороженном виде.
Для проведения анализа с помощью данного теста годятся образцы с уровнем pH в диапазоне от 4 до 9.
Необходимо постараться сохранить отобранные пипеткой образцы инородных веществ; рекомендуется перед анализом центрифугировать очень мутные образцы. Фальсификация образца мочи может привести к ошибочным результатам. Если есть подозрения на фальсификацию, следует получить другой образец и направить оба образца в лабораторию на анализ.
Обращайтесь со всеми образцами мочи так, как если бы они были потенциально заразными.
Процедура анализа
Для выполнения этого анализа можно использовать анализаторы, которые позволяют поддерживать постоянную температуру, дозирование образцов пипеткой, измерение скорости ферментативной реакции при 340нм и точное определение времени реакции.
До проведения анализа сверьтесь с протоколом конкретного анализатора, в котором приведены параметры и/иди дополнительные инструкции по применению.
Контроль качества и калибровка
Рекомендации по хорошей лабораторной практике предполагают использование контрольных образов для обеспечения правильного проведения анализа. Для поверки калибровки применяйте контрольные материалы с уровнями, близкими к уровню отсечки. Результаты контроля качества должны находиться в рамках установленных диапазонов, определенных Вашей лабораторией. Если результаты контроля качества выходят за пределы установленных диапазонов, результаты анализа являются недостоверными.
Качественный анализ
Для качественного анализа образцов используйте калибратор с концентрацией 500 нг/мл, которая является «уровнем отсечки». В качестве стандарта для определения «положительных» и «отрицательных» образцов используется калибратор котинина DRI® с концентрацией «уровня отсечки».
Полуколичественный анализ
Для полуколичественного анализа используйте все калибраторы.
Результаты и ожидаемые значения
Результаты качественного анализа
В качестве эталона для определения «положительных» и «отрицательных» образцов используется калибратор с концентрацией 500 нг/мл. Положительным считается образец, показывающий изменение в значении абсорбции (DA), равное значению, полученному для калибратора «уровня отсечки», или превышающее его. Отрицательным считается образец, показывающий изменение в значении абсорбции (DA) ниже значения, полученного для калибратора «уровня отсечки».
Полуколичественные результаты
Можно приблизительно оценить концентрацию вещества в образцах, используя стандартную кривую, полученную для всех калибраторов, и оценивая образцы количественно по сравнению со стандартной кривой. Этот способ можно использовать для подтверждения разведения или в целях контроля качества. Когда примерная концентрация в образце превышает концентрацию калибратора с самой высокой концентрацией, можно развести образец Отрицательным калибратором и повторить анализ. Диапазон анализа – от 300 нг/мл до 2000 нг/мл.
Ограничения
- Положительный результат этого анализа указывает на присутствие котинина; при этом необязательно должна быть корреляция с силой физиологического и психологического воздействия.
- Положительный результат этого анализа следует подтвердить другим неиммунологическим методом, например ГХ или ГХ/МС.
- Тест предназначен только для использования в отношении мочи человека.
- Другие вещества и/или факторы, например, технические, процедурные, другие соединения, сходные с котинином, которые, однако, не изучались в ходе исследования специфичности, могут оказать влияние на анализ и привести к ложным результатам.
Конкретные рабочие характеристики
Ниже показаны типичные рабочие характеристики, полученные для анализатора Hitachi 717. Результаты, полученные в Вашей лаборатории, могут от них отличаться.
Воспроизводимость
Отрицательный контрольный материал, положительный контрольный материал и калибратор «уровня отсечки» были проанализированы согласно модифицированному протоколу NCCLS. Делался качественный и полуколичественный анализ на всех трех уровнях по 6 повторных анализов для каждого, дважды в день в течение 10 дней.
Количественный анализ (мА/мин)
|
Калибратор / контрольный материал |
Воспроизводимость в пределах одного анализа |
Общая воспроизводимость |
||||
|
|
Среднее |
СО |
КВ, % |
Среднее |
СО |
КВ, % |
|
300 нг/мл 500 нг/мл 700 нг/мл |
404 421 437 |
2,2 2,3 2,6 |
0,5 0,5 0,5 |
404 421 437 |
2,7 2,9 3,5 |
0,7 0,7 0,8 |
Чувствительность
Чувствительность, которая определяется как самая низкая концентрация, которую можно отличить от отрицательного калибратора анализа мочи со степенью достоверности 95%, составляет 34 нг/мл.
Специфичность
Был проведен анализ соединений, структурно схожих с котинином, на перекрестную реактивность. Результаты приведены ниже:
|
Соединение |
Концентрация (мкг/мл) |
Результат |
|
3-гидрокси-котинин |
12,5 |
Положительный |
|
Ниацинамид |
500 |
Отрицательный |
|
Никотин |
500 |
Отрицательный |
|
Никотиновая кислота |
500 |
Отрицательный |
|
N-оксид никотиновой кислоты |
500 |
Отрицательный |
Соединения, структурно несхожие с котинином, дали отрицательные результаты при указанных ниже концентрациях:
Интерференция
Было исследовано потенциальное влияние эндогенных и экзогенных веществ на анализ на котинин. В анализах мочи, содержащих соединения в перечисленных ниже концентрациях, интерференция не наблюдалась. Также исследовалось возможное влияние на pH мочи.
Точность
Был проведен анализ ста девяноста четырех образцов с помощью теста DRI на котинин и иммуноферментного анализа на котинин OTI AUTO-LYTE®, в котором калибратором «уровня отсечки» служил котинин в концентрации 500 нг/мл. Все образцы были подтверждены методами ГХ/МС. Полученные результаты качественного и полуколичественного анализов суммированы ниже:
Качественный
Из 194 образцов 112 образцов дали положительный результат и 60 образцов дали отрицательный результат в обоих иммунологических анализах.
*ГХ/МС подвердила результат, полученный методом анализа теста DRI на котинин.
** Два из трех образцов, где наблюдалось расхождение, были погранично положительными.
Полуколичественный
Из 194 образцов 114 образцов дали положительный результат и 63 образца дали отрицательный результат в обоих иммунологических анализах.
*ГХ/МС подвердила результат, полученный методом анализа теста DRI на котинин.
** Два из трех образцов, где наблюдалось расхождение, были погранично положительными.