Тест «CEDIA® Теофиллин II»

№ по каталогу: 100008 (набор 17 мл)                               Для диагностики in vitro

 Предназначение

 Тест «CEDIA® Теофиллин II» - это набор реагентов для диагностики in vitro, предназначенный для количественного определения теофиллина в сыворотке и плазме человека.

 Резюме и разъяснение теста

 Теофиллин – это производное метилксантина, широко применяемое при лечении астмы, обструктивных болезней легких и неонатальной асфиксии.¹

 Существует тесная корреляция между действием теофиллина и концентрацией лекарства в сыворотке; терапевтический диапазон теофиллина составляет от 10 до 20 мкг/мл для взрослых² и от 5 до 10 мкг/мл для новорожденных при лечении асфиксии.³ Токсичность теофиллина обычно проявляется при концентрациях выше 20 мкг/мл у взрослых, ^4-7 хотя слабые симптомы могут появиться при концентрациях выше 15 мкг/мл. К числу побочных эффектов относятся анорексия, тошнота, рвота, головные боли и нервозность. Такие тяжелые побочные эффекты, как учащение ЧСС, аритмия, эпилептические припадки, остановка дыхания или остановка сердца, обычно происходят при концентрациях выше 40 мкг/мл, однако они также могут произойти и при более низких концентрациях.

 Мониторинг концентраций теофиллина в сыворотке необходим из-за индивидуальных различий в скорости клиренса теофиллина.^{8, 9} Выведение теофиллина замедлено у пациентов, страдающих ожирением, пациентов с заболеваниями печени и у тех, кто сидит на диете с большим содержанием углеводов и низким содержанием белков. У недоношенных детей младшего возраста также очень низкая скорость выведения теофиллина.⁴ Напротив, выведение теофиллина происходит быстрее у курильщиков сигарет.² В совокупности с другими клиническими данными мониторинг уровней теофиллина в сыворотке может снабдить врача полезной информацией, которую тот может использовать при корректировке дозы пациента для достижения оптимального терапевтического эффекта, избегая при этом токсичности лекарства.

 В тесте «CEDIA® Теофиллин II» применена технология рекомбинатной ДНК (Патент США №4708929) для получения уникальной системы гомогенного иммуноферментного анализа.¹⁰.

 В основе теста лежит бактериальный фермент b-галактозидаза, который с помощью генной инженерии был разделен на два неактивных фрагмента. Эти фрагменты спонтанно связываются вновь, образуя действующий фермент, который в формате теста расщепляет субстрат, что приводит к изменению цвета, которое можно измерить методом спектрофотометрии.

 В ходе анализа анализируемое вещество в образце конкурирует с анализируемым веществом, сопряженным с одним неактивным фрагментом b-галактозидазы за место связывания антитела. Если в образце присутствует анализируемое вещество, оно связывается с антителом, при этом неактивные фрагменты фермента свободно сопрягаются, образуя активный фермент. Если в образце анализируемого вещества нет, антитело связывается с анализируемым веществом, сопряженным с неактивным фрагментом, подавляя повторное соединение неактивных фрагментов b-галактозидазы, при этом не происходит образования активного фермента.

 Количество образованного активного фермента и вызванное этим изменение абсорбции прямо пропорциональны содержанию анализируемого вещества в образце.¹⁰

 Реагенты

1          EA буферный растворитель: содержит MOPS [3-(N-морфолино) пропан-сульфонокислый буфер], моноклональные антитела к теофиллину в концентрации 150 мг/мл, стабилизатор и консервант

1а        EA реагент: содержит акцепторную часть фермента (0,171 г/л), буферные соли и консервант

2          ED буферный растворитель: содержит MES (2-(N-морфолино) этансульфонокислый буферный раствор), стабилизаторы, консервант

2а        ED реагент: содержит донорскую часть фермента (0,06 мг/л), сцепленную с теофиллином, хлорфенол красный-b-D-галакторинанозид в концентрации 1,637 г/л, консервант

 Требуемые дополнительные материалы (продаются отдельно):

Калибровочный набор CEDIA Core TDM Multi-Cal, № по каталогу 100007

Имеющиеся в продаже контрольные образцы – Относительно рекомендаций проконсультируйтесь в Службе технической поддержки клиентов

 Меры предосторожности и предупреждения

 Реагенты содержат азид натрия. Избегайте попадания реагентов на кожу и слизистые оболочки. Подвергшиеся воздействию участки следует промыть большим количеством воды. В случае попадания в глаза или при проглатывании необходимо немедленно обратиться к врачу. Азид натрия может вступить в реакцию с цинковой или медной сантехникой, образуя потенциально взрывоопасные азиды металлов. При утилизации таких реагентов всегда смывайте их большими количествами воды, чтобы предотвратить накопление азидов. Очищайте открытые металлические поверхности 10% гидроксидом натрия.

 Приготовление и хранение реагентов

 Для анализаторов фирмы Hitachi см. ниже процедуру приготовления растворов. Для всех других анализаторов смотрите инструкции по применению конкретного анализатора.

 Вынимайте набор из холодильника непосредственно перед приготовлением растворов.

 Чтобы максимально снизить риск возможного загрязнения, готовьте растворы в следующем порядке.

 Раствор донорской части фермента R2: Соединить емкость 2а (реагент ED) и емкость 2 (буферный растворитель ED) с помощью одного из входящих в комплект переходников. Смешать содержимое, мягко переворачивая сосуды так, чтобы весь сублимат из емкости 2а оказался в емкости 2, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить емкость 2а и переходник от емкости 2 и выбросить их. Закрыть емкость 2 крышкой и дать содержимому постоять примерно в течение 5 минут при комнатной температуре (15-25°С). Снова перемешать содержимое и написать на этикетке емкости дату разведения. Прежде чем использовать, нужно поставить емкость непосредственно в отсек анализатора, предназначенный для реагентов, или в холодильник (2-8°С) и дать постоять в течение 5 минут.

 Раствор акцепторной части фермента R1: Соединить емкость 1а (реагент EA) и емкость 1 (буферный растворитель EA) с помощью одного из входящих в комплект переходников. Смешать содержимое, мягко переворачивая сосуды так, чтобы весь сублимат из емкости 1а оказался в емкости 1, следя за тем, чтобы не было пенообразования. Отсоединить емкость 1а от переходника и выбросить. Закрыть наполненную емкость 1 крышкой и оставить примерно на 5 минут при температуре 15-25°С. Снова перемешать содержимое и написать на этикетке емкости дату разведения. Прежде чем использовать, нужно поставить емкость непосредственно в отсек анализатора, предназначенный для реагентов, или в холодильник (2-8°С) и дать постоять в течение 5 минут.

 ПРИМЕЧАНИЕ1: Входящие в этот набор компоненты предназначены для использования в комплекте. Не смешивайте компоненты из разных партий.

ПРИМЕЧАНИЕ 2: Избегайте перекрестного загрязнения реагентов, следя за тем, чтобы крышки от бутылей с реагентами совпадали с бутылями. Раствор R2 должен быть желто-оранжевого цвета. Красный или пурпурно-красный цвет говорит о загрязнении реагента, и его следует вылить.

ПРИМЕЧАНИЕ 3: До проведения анализа растворы R1 и R2 должны находиться при температуре отсека анализатора для реагентов. См. дополнительную информацию в инструкции по применению конкретного анализатора.

ПРИМЕЧАНИЕ 4: Для обеспечения стабильности восстановленного раствора EA, его следует защищать от продолжительного непрерывного воздействия яркого света.

 Храните компоненты при температуре 2-8°С. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ ИХ. Относительно стабильности неоткрытых компонентов см. срок годности на коробке или этикетках емкостей.

Раствор R1: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С.

Раствор R2: 60 дней в холодильнике анализатора или при температуре 2-8°С

 Сбор и обработка образцов

 Для анализа годятся образцы сыворотки или плазмы (Na или Li гепарин; Na ЭДТА). Избегайте пенообразования и повторного замораживания образца. Образцы, содержащие частицы, следует центрифугировать. Закрывайте образцы крышками, храните при температуре 2-8°С и проводите анализ в течение 1 недели, или, если образец необходимо отправить в другое место, следует закрыть образец крышкой и держать в замороженном виде. Хранить образцы при температуре -20°С и проводить анализ в течение 4 недель. Со всеми образцами пациентов следует обращаться так, как если бы они были потенциально заразными.

 Процедура анализа

 Для выполнения этого анализа можно использовать биохимические анализаторы, которые позволяют поддерживать постоянную температуру, дозирование образцов пипеткой, смешивание реагентов, измерение скорости ферментативной реакции и точное определение времени реакции. В компании Microgenics имеются инструкции по применению, содержащие конкретные параметры приборов.

 ПРИМЕЧАНИЕ: Если анализатор не читает штрих-код, числовую последовательность на этикетке со штрих-кодом можно ввести вручную с помощью клавиатуры.

 Контроль качества и калибровка¹¹

 Рекомендуется калибровка по 2 точкам

- после замены бутыли с реагентом

- после замены партии реагента

- согласно требованиям процедур контроля качества

Поверка калибровки: не требуется.

 Рекомендации по хорошей лабораторной практике предполагают проведение контроля качества не менее чем для двух концентраций (низкие и высокие значения) каждый день, когда анализируются образцы пациентов, и каждый раз при проведении калибровки. Отслеживайте контрольные значения на предмет каких-либо тенденций или сдвигов. В случае обнаружения каких-либо тенденций или сдвигов, или если результаты стандарта не отвечают указанному диапазону, необходимо проверить все рабочие параметры.

 Результаты и ожидаемые значения

 Тест «CEDIA® Теофиллин II» предназначен для количественного анализа образцов пациентов в диапазоне концентраций от 0,8 мкг/мл до 40 мкг/мл.

 Результаты анализа образцов, содержащих концентрации выше 40 мкг/мл, могут быть показаны как «более 40 мкг/мл», или же одну часть образца можно развести одной частью калибратора низкой концентрации и повторить анализ. Полученное после повторного анализа значение следует выводить следующим образом:

 Фактическое значение = (2 х значение разведенного образцы) – концентрация калибратора низкой концентрации

 Результаты анализа образцов, концентрация в которых ниже минимальной определяемой концентрации анализа, должны выглядеть следующим образом: <0,8 мкг/мл.

 Для перевода мкг/мл в мкмоль/л используйте следующий переводной коэффициент:

 

                                               мкг/мл х 5,55 = мкмоль/л

                                               мкмоль/л х 0,18 = мкг/мл

 

В качестве ориентира относительно терапевтических и токсических уровней теофиллина можно использовать следующие опубликованные данные:

Исследователь	Терапевтический   диапазон, мкг/мл	Токсический   диапазон, мкг/мл

 Ограничения

 Число пациентов, у которых могут быть антитела к b-галактозидазе      E. coli, чрезвычайно      мало. Однако некоторые образцы, содержащие такие антитела, могут показать      ошибочно высокие результаты, не соответствующие клиническому профилю.

1. По причине перекрестной реактивности с      1,3-диметилмочевой кислотой, тест «CEDIA® Теофиллин II» не следует использовать для количественного анализа      образцов пациентов, страдающих уремией.^15-19
2. Так как в тесте используются антитела мыши,      существует вероятность интерференции противомышиных антител человека (HAMA) в образце, что      может привести к ложно повышенным результатам.

 Конкретные рабочие характеристики

 Ниже показаны типичные данные, получаемые на анализаторе Hitachi 911.²⁰ Результаты, получаемые в Вашей лаборатории, могут от них отличаться. Дополнительные рабочие характеристики конкретного анализатора см. в инструкции по его применению.

 Воспроизводимость

 Изучение воспроизводимости с использованием упакованных реагентов и контрольной сыворотке согласно руководству по модифицированному эксперименту с повторением одинаковых испытаний NCCLS дало следующие результаты в мкг/мл.

	Воспроизводимость в   рамках одного анализа			Общая   воспроизводимость
n x (мкг/мл) SD (мкг/мл) CV%	120 5,1 0,2 3,3	120 15,1 0,3 1,9	120 29,3 0,4 1,3	120 5,1 0,26 5,1	120 15,1 0,36 2,4	120 29,3 0,59 2,0

 

Сравнение метода

 В результате сравнения метода анализа «CEDIA® Теофиллин II» (y) с серийным иммунологическим анализом методом флуоресцентной поляризации (x) была получена следующая корреляция (мкг/мл):

 Регрессия по Демингу                                            Линейная регрессия                      

Количество измеренных образцов: 125

Концентрации в образцах составляли от 0,9 до 37,4 мкг/мл

 Линейность

 Образец с высокой концентрацией разводился калибратором низкой концентрации. Затем определялся процент выхода путем деления значения, полученного в результате анализа, на ожидаемое значение.

Образец с высокой   концентрацией, %	Ожидаемое значение   (мкг/мл)	Результат анализа   (мкг/мл)	Выход, %
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0	--- 44,1 39,2 34,3 29,3 24,4 19,5 14,6 9,6 4,7 ---	46,9 42,1 38,3 33,6 29,5 24,9 19,9 14,5 9,6 4,4 0,0	--- 95,5 97,7 98,0 100,7 102,0 102,1 99,3 100,0 93,6 ---

 Выход

Образец с высоким содержанием теофиллина (теофиллин добавлялся в образец с низким содержанием теофиллина, при этом добавление количества находилось в пределах 10% от диапазона анализа) разводился образцом, не содержащим анализируемого вещества. После чего определялся процент выхода путем деления полученного в результате анализа значения на ожидаемое значение.

Образец с высокой   концентрацией, %	Ожидаемое значение   (мкг/мл)	Результат анализа   (мкг/мл)	Выход, %
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0	--- 44,6 39,6 34,7 29,7 24,8 19,8 14,9 9,9 5,0 ---	46,3 42,3 38,2 34,3 29,8 25,1 20,0 14,8 10,0 4,7 0,1	--- 101 103 106 107 108 108 106 106 100 ---

 Специфичность

 Следующие соединения были проверены на перекрестную реактивность в ходе анализа.

Не было обнаружено влияния на анализ «CEDIA Теофиллин II» следующих веществ:

Вещество	Концентрация
Билирубин Гемоглобин Триглицериды Ревматоидные факторы Общий белок	66 мг/дл 1000 мг/дл 2,0 г/дл 180 МЕ/мл 12,0 г/дл

Чувствительность

 Минимальная концентрация, обнаруживаемая с помощью анализа «CEDIA Теофиллин II», составляет 0,8 мкг/мл (4,4 мкмоль/л). Это значение было определено путем расчета концентрации теофиллина, которая дала бы ответ, равный двум стандартным отклонениям, превышающим значение калибратора низкой концентрации.